酵母单杂交筛选技术:关于HIV想必大家都不陌生，***HIV病毒后潜伏周期长，且目前没有完全的***方法。为了彻底***HIV，不让其发病就要从2方面入手：要么消除潜伏***的细胞，要么防止潜伏原病毒的细胞被***。也就是需要抑制HIV病毒的转录。但是关于HIV在人细胞中的复制、转录和潜伏期调控的分子网络仍不完全确定，所以目前HIV仍不能被**。为了帮助解决这个问题，波士顿大学的研究者，使用酵母单杂交筛选技术，以HIV-1,HIV-2的LTR（启动子和增强子）为诱饵，筛选了人的转录因子文库（包含1086个人的转录因子），**终绘制了调节HIV-1和HIV-2的转录网络图谱，结果发表在2021年的PNAS杂志上。酵母杂交案例专业的硕博团队。欧易生物酵母文库

酵母文库实验本研究鉴定了一个可以与MdMYB9相互作用的蛋白MdTRB1。实验表明，MdTRB1可以正向调节花青素和原花青素的累积。MdTRB1与MdMYB9结合可以增强后者对下游基因的转录***活性。而MdTRB1与MdJAZ1的结合，可以干扰其与MdMYB9的互作，进而负向调控MdTRB1介导的对花青素和原花青素积累的促进作用。本研究表明，JAZ1-TRB1-MYB9复合物可以动态调控JA介导的花青素和原花青素的积累。本研究为进一步研究JA对花青素和原花青素生物合成的调节提供了新见解。安徽品质酵母文库报价酵母三杂交系统原理酵母双杂交文库构建。

目前，欧易生物负责该水稻转录因子文库的维护和保存工作，并对广大水稻科研工作者提供转录因子筛选服务。如去年欧易生物助力中国科学院分子植物科学***创新中心的王二涛老师应用该文库对水稻-丛枝菌根进行了深入研究，成功构建了水稻-丛枝菌转录调控网络，结果发表于《Cell》封面。截至文章发表，该文库已收录了1683个水稻转录因子，隶属于54个家族，覆盖预测的水稻转录因子总量的70%。文库中水稻转录因子的a基因信息来源于PlantTFDB和KOME数据库。文库载体使用pGADT7，酵母菌株使用Y187，每一个转录因子菌株**保存于96孔板中。

酵母单杂交结果显示，磷酸盐饥饿响应因子OsPHR1/2/3可以***51个目标启动子中的25个，包括OsRAM1、OsRAD1、OsWRI5A等。OsRAM1、OsRAD1、OsWRI5A自身又可以调控许多菌根共生相关基因的表达（图A）。对丛枝菌根共生响应基因启动子序列预测分析显示，有78个转录因子被富集，87%的菌根共生响应基因受到OsPHR1/2/3的调控，其中42%受到OsPHR1/2/3的直接调控。因此推测OsPHR1/2/3可能是菌根共生调控网络中的一个关键调控枢纽（图A-B）。EMSA和荧光素酶报告实验证实，OsPHR12可以直接结合并***OsRAM1、OsWRI5A、OsPT11、OsAMT3启动子序列（图C-F），并且这种结合依赖于启动子中的P1BS元件（图G）。初筛+复筛提高目标阳性克隆质粒精确度。一对一筛库验证服务，客户无需再次验证。

通过酵母双杂交进行筛选，结果显示 SWC6 可以在蓝光下与 CRY1 相互作用（图 A-C）。同样，酵母双杂交实验显示 CRY2 也可以在蓝光下与 SWC6 相互作用（图 D）。并通过 pull-down、split-LUC、semi-in vivo pull-down、Co-IP 实验（图 E-L）证实 CRY1、CRY2 与 SWC6 的结合是蓝光依赖性的。SWC6 是真核生物中已报道的 SWR1 复合物亚基，负责催化 H2A.Z 在染色质上的替换。已报道 SWR1 复合物中 SWC6 可以与 ARP6 亚基结合。Pull-down、split-LUC、semi-in vivo pull-down、Co-IP 实验（图 A-H）显示，CRY1、CRY2 可以蓝光依赖性与 ARP6 结合。酵母双杂交文库构建实验流程。湖南宣传酵母文库报价

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进行了酵母双杂交文库的筛选，结果显示钙依赖的种子特异性蛋白激酶SPK可以与OsNF-YB9相互作用，分段截取互作验证显示OsNF-YB9的N端是互作所必须的（图a-b），并通过双荧光分子互补实验、BiFC、体外GST-pulldown实验得以证实（图c-e）。亚细胞定位显示SPK主要在细胞质中表达，OsNF-YB9在细胞质和细胞核中都有表达，共表达SPK和OsNF-YB9***促进了OsNF-YB9的入核（图f），表明SPK和OsNF-YB9的相互作用可能促进了OsNF-YB9从细胞质向细胞核的运输。RT-PCR显示SPK在发育中的种子中高表达，在5DAF开始***，并在10-30DAF维持高表达水平（图a-b）。spk敲除突变体种子中垩白率的增加（图c-e），但粒形和粒重与野生型没有***差别。欧易生物酵母文库

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